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項目名稱

委托單位

課題老師

項目負責人

立項時間

結題時間

項目基本要求

1、成功制備重組蛋白，純度＞90%。

2、篩選獲取單克隆抗體，2-5株。

步驟

內容

周期

項目流程

第1步

1. 委托生工生物合成基因
2. 引物設計與合成
3. 質粒擴增和菌種凍存

約2周

第2步

1. 基因擴增
2. 全長蛋白表達載體構建
3. 片段蛋白表達載體構建
4. 菌株鑒定和保存

1-2周

第3步

1. 初步評估不同載體的表達情況
2. 優選符合要求的載體做小試驗證
3. 根據實驗結果進行條件優化

1周

第4步

1. 根據表達量放大表達純化
2. 考核蛋白穩定性

1周

第5步

1. BALB/c小鼠免疫4-5針（每種蛋白免疫3只）
2. 免疫前后尾血效價檢測
3. 優化篩選系統

2個月

第6步

1. 細胞融合，HAT選擇培養
2. 間接ELISA法篩選單克隆，有限稀釋法
3. 單抗細胞株擴大穩定培養

1-2個月

第7步

1. 陽性單克隆細胞注入小鼠，制備腹水
2. ProtienA/G純化單克隆抗體
3. 抗體檢測性能驗證

1個月